Simple Western 简介
Simple Western 是由美国 ProteinSimple 公司于 2011 年推出的革新性 Western Blot 技术。自推出以来,该技术备受全球重要的研究机构及科研工作者的认可,全球范围内已经有数百家科研单位及药物研发公司陆续引进了该平台。凭籍着标准化的操作、快速的实验流程,以及可重复、高质量的实验数据。Simple Western 技术推出短短数年,已有大量文献发表(http://www.proteinsimple.com/citations.html)
工作原理
Wes 采用微量样品管,以一根毛细管作为载体,结合专利的内涂层技术,可以实现在同一样品管中完成样品的上样、分离、固定、免疫放大和化学检测,并自动进行数据分析,整个过程无需人工干预, 可有效提高检测结果的准确性和可重复性。
Simple Western 技术的主要特点
1.实验流程标准化、自动化
Simple Western 技术可实现所有检测步骤的自动化,包括蛋白上样、分离、固定、免疫印迹、洗涤、检测及数据分析等。可避免传统方法因实验步骤繁多、检测流程较长而最常导致的结果重复性差问题。
2.节约珍贵样品
由于采用了毛细管电泳微缩技术,单个样品上样体积只需 3~5 uL,浓度 0.1~4 ug/uL,因此可尝试数目有限的流式分选细胞、干细胞、珍稀的临床组织等等,而传统 WB 往往需要 20~100 ug 总蛋白。因此,上述珍稀样品往往不足以进行蛋白水平的实验,导致中心法则证据不完整。
3.蛋白分子量检测范围宽
2~440 kDa;由于蛋白固定机理与传统 WB 不同,因此 Simple Western 可轻松检测 mTOR、EGFR、ATM、Dystrophin 等高达几百 KD 的大分子量蛋白,不需再摸索任何转膜条件;而在传统 WB 操作中,大分子量蛋白转膜效率极其低下,甚至 完全无法转印。
4.数据分析标准化、自动化
软件将自动给出蛋白的表达丰度等数字信息,不需进行人工灰度分析, 数据分析不受传统 WB 条带形状、背景信号等干扰,避免主观倾向,更易被杂志认可;数字化定量数据亦可直接方便进行条形图绘制、T 检验、方差分析等统计实现。
5.条带图片漂亮规则,更易发表
Simple Western 技术将底层物理发光信号光斑转换成正态分布峰图,进而根据峰图输出规则美观的条带。传统 WB 中经常出现的哑铃条带、微笑条带、过曝空斑、背景噪点等问题,这不仅影响条带美观度,在条带圈选定量、背景扣除时也将引入很大的偏差,为了得到一张可发表的实验图片, 往往需要进行 n 多次重复实验。Simple Western 技术不仅保留了生物学意义上的表达关系,条带呈现形式也更加赏心悦目,结果更易被杂志接收。
6.泳道条带可自由组合、自由排列
每根毛细管对应一个泳道,由于毛细管彼此独立,因此获得原始实验数据之后,可进一步将不同泳道进行排列组合,从不同角度阐释实验数据,一次实验可获得多张实验图片,从而避免了重复实验。
7.快速高效,加快发表速度
由于避免了传统 WB 大量实验摸索和实验重复环节,Simple Western技术能大大加快 WB 的项目效率,从而以最快的速度获得论文中Western Blot 分子机理方面的数据。